真核表達(dá)

真核細(xì)胞中蛋白表達(dá)比大腸柑橘?gòu)?fù)雜很多，一般會(huì)選擇分泌表達(dá)載體，以便于蛋白純化。真核表達(dá)系統(tǒng)有酵母表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。步驟包括：

1. 克隆目的基因

選用合適的內(nèi)切酶把外源基因克隆于表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)。

2. 重組載體線性化

環(huán)狀質(zhì)粒的整合效率十分地，重組載體酶切線性化后整合效率會(huì)提高。不同的內(nèi)切酶線性化會(huì)得到不同的轉(zhuǎn)化子。

3. 轉(zhuǎn)化

目前真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)化方法有很多種，例如鋰鹽法；PEG法，原生質(zhì)球法；電穿孔法等。一般會(huì)選用原生質(zhì)球或電擊法。

4. 篩選

可先在不含組氨酸的培養(yǎng)基上篩選，然后再PCR篩選。大量轉(zhuǎn)化子的篩選，則可用原為點(diǎn)雜交進(jìn)行。

5. 鑒定表型和誘導(dǎo)表達(dá)

外源蛋白的表達(dá)在真核細(xì)胞中分兩步，即菌體生長(zhǎng)和蛋白誘導(dǎo)表達(dá)。先在培養(yǎng)基中培養(yǎng)菌體，達(dá)到一定的OD值后，誘導(dǎo)表達(dá)。