一步法單菌落質(zhì)粒DNAout
一步法單菌落質(zhì)粒DNAout低于1.7，考慮RNA降解，*常見的原因是RNA酶去除不徹底。
建議你1.EP管和tip用DEPC水泡，如果來不及也可以買現(xiàn)成的。
2.提取時(shí)注意低溫，防止RNA降解。
3.洗滌用的75％酒精用DEPC水配制，*后融解RNA的水也應(yīng)是DEPC水，或去RNA酶水。
4.提取的RNA盡快轉(zhuǎn)錄成cDNA，－70度保存時(shí)間不宜過長（一般不超過一個(gè)月）。
一步法單菌落質(zhì)粒DNAout提RNA提取秘訣：
1.提取RNA過程應(yīng)該盡量快，不要太過仔細(xì)，以減少RNA的降解
2.在吸取上清液時(shí)要小心，離心管盡量不要抖動(dòng)和傾斜，保持其從離心機(jī)里拿出來的角度吸取，加入異丙醇的那一步要尤其小心，上清液不要貪多
3.一步法單菌落質(zhì)粒DNAout干燥時(shí)不要太過
4.你跑的電泳是不是普通的瓊脂糖凝膠電泳？這個(gè)結(jié)果不是很準(zhǔn)確，因?yàn)樵谂苣z的過程當(dāng)中RNA也會(huì)降解，但并不一定你提取的RNA效果不好，一般情況下跑出來的電泳結(jié)果有3條帶，2000bp,1000bp,100多的位置各有一條帶，分別是28s，18s，5s，如果5S很亮，表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反轉(zhuǎn)錄，一步法單菌落質(zhì)粒DNAout然后用管家基因檢測，只要能擴(kuò)出明亮的條帶即對你的實(shí)驗(yàn)沒有影響。注意：在用管家基因檢測時(shí)應(yīng)增加循環(huán)數(shù)，以檢測是否有DNA污染。