AP標(biāo)記的抗生物素抗體
AP標(biāo)記的抗生物素抗體低于1.7，考慮RNA降解，*常見的原因是RNA酶去除不徹底。
建議你1.EP管和tip用DEPC水泡，如果來不及也可以買現(xiàn)成的。
2.提取時注意低溫，防止RNA降解。
3.洗滌用的75％酒精用DEPC水配制，*后融解RNA的水也應(yīng)是DEPC水，或去RNA酶水。
4.提取的RNA盡快轉(zhuǎn)錄成cDNA，－70度保存時間不宜過長（一般不超過一個月）。
AP標(biāo)記的抗生物素抗體提RNA提取秘訣：
1.提取RNA過程應(yīng)該盡量快，不要太過仔細(xì)，以減少RNA的降解
2.在吸取上清液時要小心，離心管盡量不要抖動和傾斜，保持其從離心機里拿出來的角度吸取，加入異丙醇的那一步要尤其小心，上清液不要貪多
3.AP標(biāo)記的抗生物素抗體干燥時不要太過
4.你跑的電泳是不是普通的瓊脂糖凝膠電泳？這個結(jié)果不是很準(zhǔn)確，因為在跑膠的過程當(dāng)中RNA也會降解，但并不一定你提取的RNA效果不好，一般情況下跑出來的電泳結(jié)果有3條帶，2000bp,1000bp,100多的位置各有一條帶，分別是28s，18s，5s，如果5S很亮，表示RNA降解
5.提完的RNA可以做反轉(zhuǎn)錄，AP標(biāo)記的抗生物素抗體然后用管家基因檢測，只要能擴出明亮的條帶即對你的實驗沒有影響。注意：在用管家基因檢測時應(yīng)增加循環(huán)數(shù)，以檢測是否有DNA污染。