DNA提取 :一、200uL黃槍頭實驗原理
DNA是遺傳信息的載體,是*重要的生物信息分子,因此DNA的提取也是分子生物學實驗技術(shù)中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品(如**、**、血液、培養(yǎng)細胞、動物組織及植物組織等)中提取高純度基因組DNA的服務(wù)。
二、實驗步驟
1、細胞裂解
● CTAB法 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基**基溴化銨)是一種陽離子去污劑,可融解細胞膜,并與核酸形成符合物。該復合物在高鹽溶液中(>0.7M NaCl)是可溶的,200uL黃槍頭通過有機溶劑抽提,去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑,高溫(55℃-65℃)下可裂解細胞,使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動物組織、細胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機械剪切、超聲波破碎、勻漿等,化學方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液,收集水相,乙醇沉淀DNA,*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測
● 200uL黃槍頭瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計檢測DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰,OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度=OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計檢測DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9,說明DNA純度較好;若小于1.7有可能有蛋白污染;若大于2.0,說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、200uL黃槍頭樣品處理
因細胞結(jié)構(gòu)及所含成分不同,樣品預處理的方法也有差異。不同樣品的預處理方法大致如下:
● 植物組織——液氮研磨
● 動物組織——勻漿、液氮研磨
● 培養(yǎng)細胞——蛋白酶K消化
● 細 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
200uL黃槍頭注意:客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫(-20℃或-70℃)冷凍保存的樣品,避免反復凍溶。