DNA提取 ：一、口腔采樣拭子實驗原理
DNA是遺傳信息的載體，是*重要的生物信息分子，因此DNA的提取也是分子生物學實驗技術中*重要、*基本的操作之一。我公司提供從各種不同來源的樣品（如**、**、血液、培養(yǎng)細胞、動物組織及植物組織等）中提取高純度基因組DNA的服務。
二、實驗步驟
1、細胞裂解
● CTAB法 CTAB（hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基**基溴化銨）是一種陽離子去污劑，可融解細胞膜，并與核酸形成符合物。該復合物在高鹽溶液中（>0.7M NaCl）是可溶的，口腔采樣拭子通過有機溶劑抽提，去除蛋白、多糖、酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。此法多用于植物組織、**等材料。
● SDS法 SDS是一種陰離子去污劑，高溫（55℃-65℃）下可裂解細胞，使蛋白變性、染色體解析。常用于血液、**、酵母、動物組織、細胞等樣品基因組DNA的提取。
● 其他方法 物理方法如機械剪切、超聲波破碎、勻漿等，化學方法如異硫氰酸胍、堿裂解、蛋白酶K消化等。
2、DNA分離純化
● 用酚/氯仿抽提裂解液，收集水相，乙醇沉淀DNA，*后用TE溶解DNA沉淀。
3、DNA的定量及檢測
● 口腔采樣拭子瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA片段的分子質(zhì)量。
● 紫外分光光度計檢測DNA濃度 DNA在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當于大約50ug/ml雙鏈DNA。提取的基因組DNA樣品濃度＝OD260×50ug/ml×稀釋倍數(shù)。
● 紫外分光光度計檢測DNA純度
一般用OD260/OD280值檢測DNA樣品的純度。OD260/OD280值約為1.7-1.9，說明DNA純度較好；若小于1.7有可能有蛋白污染；若大于2.0，說明有RNA污染或DNA已經(jīng)降解。
三、口腔采樣拭子樣品處理
因細胞結構及所含成分不同，樣品預處理的方法也有差異。不同樣品的預處理方法大致如下：
● 植物組織——液氮研磨
● 動物組織——勻漿、液氮研磨
● 培養(yǎng)細胞——蛋白酶K消化
● 細 菌——溶菌酶消化
● 酵 母——Lyticase消化、玻璃珠破碎
口腔采樣拭子注意：客戶*好提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復凍溶。