鏈霉素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【測(cè)定原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗鏈霉素抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出相應(yīng)殘留物鏈霉素的含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.5ppb
檢測(cè)時(shí)間： 75min
鏈霉素試劑盒樣本檢測(cè)下限：
組織 ………………………………………20ppb
牛奶 ………………………………………20ppb
蜂蜜/蜂王漿………………………………10ppb
交叉反應(yīng)率：
鏈霉素……………………………………100%
雙氫鏈霉素……………………………… 108%
卡拉霉素 …………………………………<1%
慶大霉素…………………………………<1%
樣本回收率：
組織 …………………………………85%±10%
牛奶 …………………………………95%±15%
蜂蜜/蜂王漿…………………………75%±15%
【試劑盒組成】
1、 微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
3、 酶標(biāo)記物 12ml…………………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml ………………………綠色帽
5、 底物A液 7ml ………………………白色帽
6、 底物B液 7ml …………………… 黑色帽
7、 終 止 液 7ml …………………… 黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml ……………… 透明帽
9、 2X 濃縮復(fù)溶液 50ml ·……………… 藍(lán)色帽
鏈霉素試劑盒【 所用儀器、試劑】
具備的儀器：酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮吹儀、刻度移液管
微量移液器：?jiǎn)蔚?nbsp;20μl～200μl、單道100μl～1000μl、多道 30～300 μl
試 劑：濃磷酸、氫氧化鈉、Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、正己烷
【樣本前處理步驟】
u 樣本處理前須知
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。
（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
u 樣本前處理需配制：
配液1、將濃縮復(fù)溶液用去離子水按1：9稀釋?zhuān)?份濃縮復(fù)溶液+9份去離子水）。
配液2、0.01M PBS溶液2.58gNa2HPO4·12H2O+0.435gNaH2PO4·2H2O +4.25gNaCL加去離子水定溶至1L。
配液3、0.04M磷酸溶液1ml濃磷酸加去離子水定溶至360ml。
配液4、1M NaOH溶液 稱(chēng)取4gNaOH加去離子水定溶至100ml。
u 樣本處理：
（a）牛奶樣本的處理方法
1、 取牛奶1ml，按1:39稀釋?zhuān)旌?0s。（50 ul牛奶+1950 ul稀釋后的復(fù)溶液）
2、 取50ul用于分析。
稀釋倍數(shù)：40
（b）雞肉、雞肝樣本的處理方法
1、 取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本與8ml 0.01M PBS緩沖液混合5min，置56℃水浴環(huán)境放置30min；
2、 室溫4000r/min以上，離心10min；
3、 取1ml上清液加入1ml正己烷，充分混勻，室溫4000r/min以上，離心5min
4、 去上層液體取50ul下層液，加入450ul 稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s；
5、 取50ul用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40
（c）蜂蜜、蜂王漿：
1、 稱(chēng)量2±0.05g 樣本加入4ml 0.04M磷酸，振蕩至完全溶解，
2、 室溫4000r/min以上，離心5min，直至清亮。（蜂蜜樣本可不用離心直接進(jìn)行第3步）
3、 加入450ul 1M NaOH將PH值調(diào)至7-9之間.(蜂王漿樣本需將全部上清移至另一干凈離心管中調(diào)節(jié)PH值至7-9之間)
4、 室溫4000r/min以上，離心5min ，直至清亮。
5、 取50ul上清液，加入450ul稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s；
6、 取50ul用于分析。
稀釋倍數(shù)：20 檢測(cè)下限：10ppb
鏈霉素試劑盒【酶標(biāo)**分析程序】
測(cè)定前應(yīng)須知：
1、 使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、 在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線(xiàn)照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
操作步驟：
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的微孔及框架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗
滌液。
4、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl /孔，然后入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應(yīng)30min。
6、 取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭
刺破）。
7、 每孔加入酶標(biāo)記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗，4-5遍（同上），用吸
水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
8、 顯色：每孔加入底物A液50ul，再加底物B液50ul，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
9、 測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，在5min內(nèi)讀完數(shù)
據(jù)），測(cè)定每孔OD值。
鏈霉素試劑盒【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含克倫特羅的含量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243；0.5ppb為1.816；1.5ppb為1.415；4.5ppb為0.74；13.5ppb為0.313； 40.5ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是13.5ppb-40.5ppb; 樣本2的濃度范圍是1.5ppb-4.5ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實(shí)際濃度。
1、定量分析：
所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：
B/B0 (%)
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
鏈霉素(ppb) [μg/kg]
圖1：鏈霉素檢測(cè)試劑盒的回歸曲線(xiàn)
4、再現(xiàn)性：
%CV
鏈霉素(ppb) [μg/kg]
圖2：鏈霉素檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出鏈霉素檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)鏈霉素濃度作曲線(xiàn)，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)不成線(xiàn)性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下
一步操作。
3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線(xiàn)下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。