林可霉素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物林可霉素與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)其抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含蘇丹林可的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出殘留物林可霉素的含量。
林可霉素試劑盒【適用范圍】
適用于檢測(cè)動(dòng)物組織（肌肉、肝臟、雞肉、水產(chǎn)）蜂蜜、牛奶等樣本中林可霉素類**的殘留量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.1ppb
檢測(cè)時(shí)間： 75 min
樣本檢測(cè)下限：
組織…………………………………………… 2ppb
蜂蜜…………………………………………… 2ppb
牛奶 ……………………………………………2ppb
樣本回收率
組織……………………………………80% ±10%
蜂蜜……………………………………80% ±10%
牛奶 ……………………………………85% ±10%
交叉反應(yīng)率
林可霉素……………………………………100%
卡娜霉素……………………………………0.1%
鏈霉素………………………………………0.1%
【試劑盒組成】
1、微量測(cè)試孔：每條8孔，一板12條
2、標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1 ppb、 0.3 ppb、
0.9ppb、2.7ppb、8.1 ppb
3、酶標(biāo)記物 12ml………………………………紅色帽
4、抗體工作液 7ml………………………………綠色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………棕色帽
6、底物液 B液 7ml……………………………… 黑色帽
7、終 止 液 7ml……………………………… 黃色帽
8、20X濃縮洗滌液 40ml…………………………白色帽
9、2X濃縮復(fù)溶液 50ml…………………………藍(lán)色帽
林可霉素試劑盒【所用儀器、試劑】
儀 器：微孔板酶標(biāo)儀450nm/630nm、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮?dú)獯蹈裳b置、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量
0.01g）
微量移液器：?jiǎn)蔚?nbsp;20μl～200μl、100μl～1000μl、多道 250μl
試 劑：甲醇、鹽酸
【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
配液1: 0.015M鹽酸溶液量取1.25ml濃鹽酸加入到盛有去離子水的容器中定容至1L。
配液2: 甲醇－0.015M鹽酸溶液量取10ml甲醇和60ml0.015M鹽酸溶液混合均勻。
配液3、將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的稀釋。
配液4、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
林可霉素試劑盒【樣本前處理步驟】
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
u 樣本處理方法：
（A）水產(chǎn)、禽類、豬、牛、羊等動(dòng)物組織（樣本稀釋倍數(shù)20）
1、用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本；
2、稱取2.0±0.05g均質(zhì)物至50ml聚苯乙烯離心管中，加入4ml甲醇－0.015M鹽酸溶液，用振蕩器振蕩5min；
3、4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫（20-25℃）離心5min；
4、移取50μl上清液，加入450μl復(fù)溶工作液充分混勻；
5、取50μl用于分析。
（B）蜂蜜、蜂王漿（樣本稀釋倍數(shù)20）
1、稱取2.0±0.05g蜂蜜至50ml聚苯乙烯離心管中，加入4ml去離子水，將蜂蜜全部溶解，置振蕩器中振蕩3min；
2、4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫（20-25℃）離心5min；
3、取上層清液50 μl，加入450μl復(fù)溶工作液，充分混勻；
4、取50μl用于分析。
（C）牛奶樣品處理方法（樣本稀釋倍數(shù)20）
1、稱取2.0±0.05g奶粉樣本至50ml離心管中，加入4ml甲醇，充分振蕩，室溫4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫（20-25℃）離心5分鐘。
2、取50μl上清液，再加入450μl復(fù)溶工作液，充分混勻；
3、取50μl用于分析。
【酶標(biāo)**分析程序】
林可霉素試劑盒操作步驟：
1、從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室 溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
5、取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl /孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭
刺破）。
6、每孔加入酶標(biāo)記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。重復(fù)步驟6。
7、顯色：每孔加入底物液A液50μl，再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
8、測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)
定每孔OD值。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含林可霉素成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ppb)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.310， 樣本2的吸光度值為0.820，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.610；0.1ppb為1.350；0.3ppb為1.030；0.9ppb為0.720； 2.7ppb為0.359；8.1ppb為0.198。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb； 樣本2的濃度范圍是0.3 ppb-0.9 ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素實(shí)際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以蘇丹林可濃度（ng /ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素實(shí)際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?b>
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線
B/B0 (%)
林可霉素 (ppb) [μg/kg]
圖1：林可霉素檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性
%CV
林可霉素(ppb) [μg/kg]
圖2：林可霉素檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出林可霉素檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)蘇丹林可濃度作曲線，可以看到全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一
步操作。
3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見外包裝。