泰樂菌素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物泰樂菌素與微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭其抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含泰樂菌素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出殘留物泰樂菌素的含量。
【試劑盒技術(shù)指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.5ppb
檢測時間： 45min
泰樂菌素試劑盒樣本檢測下限：
組織………………………………3ppb
蜂蜜 ……………………………1.5ppb
血清………………………………10ppb
牛奶………………………………10ppb
樣本回收率
組織……………………………85±10%
蜂蜜……………………………85±15%
交叉反應(yīng)率：
泰樂菌素 ……………………… 100%
紅霉素……………………………1%
與其他大環(huán)內(nèi)酯類**交叉反應(yīng)小于1%
試 劑 盒 組 成
1、微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、標 準 液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb、 0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、 13.5ppb、 40.5ppb
3、酶標記物 7ml …………………………… 紅色帽
4、抗體工作液 7ml ……………………………… 綠色帽
5、底物A液 7ml ………………………………棕色帽
6、底物B液 7 ml………………………………黑色帽
7、終止液 7 ml ………………………………黃色帽
8、2X濃縮復(fù)溶液 50 ml…………………………藍色帽
9、20X濃縮洗滌液 40ml……………………… 白色帽
10、使用說明書………………… …………………1份
泰樂菌素試劑盒【所用儀器、試劑】
（1）設(shè)備：
微孔板酶標儀(450nm)、振蕩器、離心機、微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl 、容量瓶：100ml，500ml，1000ml
（2）試劑
氫氧化鈉、甲醇、濃HCl、乙腈、三氯甲烷
泰樂菌素試劑盒【實驗前溶液配制】
配液1：0.1M NaOH : 0.4gNaOH 加去離子水100ml溶解
配液2：樣本提取液（乙腈-0.1M HCl）—甲醇溶液:將乙腈84ml+0.1MHCl 16ml混合，再加入18ml甲醇混合。
配液3：復(fù)溶工作液2X復(fù)溶液在使用前請按1：1稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）
配液4：洗滌液將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用蒸餾水稀釋20×濃縮洗滌液在使用前請按1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水）（可按需配置）
【樣本前處理步驟】
樣本前處理須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、牛、兔、魚、蝦等。
（b）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
樣本前處理方法
（A）肌肉、肝臟樣本 （樣本稀釋倍數(shù)2）
1、 用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；
2、 稱取2±0.05g樣本于50ml離心管中，加入8ml樣本提取液，用振蕩器振蕩5分鐘；4000轉(zhuǎn)/分以上,室溫離心10分鐘；
3、 取上清液2ml，加入0.1M NaOH溶液1ml,混合后加入 3ml三氯甲烷萃取，振蕩器上振蕩5分鐘；
4、 4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干；
5、 用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；
6、 取50ul用于分析。
（B）蜂蜜樣本（樣本稀釋倍數(shù)1）
1、 稱取1±0.05g樣本于50ml離心管中，加2ml去離子水渦動2分鐘使其溶解，再加入10ml三氯甲烷上下振蕩5分鐘；
2、 4000轉(zhuǎn)/分以上，室溫離心10分鐘。去除上層相，取下層全部有機相至干凈玻璃試管中，于56℃水浴下氮氣/空氣吹干；用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解干燥后的殘留物，混合30s；
3、 取50ul用于分析。
（C） 血清樣本 (樣本稀釋倍數(shù)：20倍)
1、將血樣本于室溫放置30min，于10℃，4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；
2、取50μl血清，加入950μl稀釋后的復(fù)溶液混合，混合30s；
3、取50μl液體用于分析。
（b）牛奶
1、取1ml牛奶樣本于離心管中，在3000r/min，4℃離心10min，去除上層脂肪。
2、取50ul上清液，加入950ul 稀釋后的復(fù)溶液混勻，混合30s。
3、取50μl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20倍
【酶標**分析程序】
泰樂菌素試劑盒操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品/樣本50μl /孔，然后加酶標記物50μl/孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境避光反應(yīng)30分鐘。
5、 洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加洗滌液 250μl/孔，每次浸泡15~30秒，充分洗滌4－5次，用吸水紙拍干。
6、顯色：每孔先各加入底物液A 50μl，再各加入底物液B 50μl，輕輕晃蕩混勻，并在25℃下避光反應(yīng)15分鐘。
7、讀數(shù)：每孔各加50μl終止液，在酶標儀于450nm處測定OD值（建議用450/630nm雙波長檢測，在5分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與泰樂菌素的含量成負相關(guān)。
1、粗略判定
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng /ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值0.241，樣本2的吸光度值為0.785，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.260；0.5ppb為1.640；1.5ppb為1.234；4.5ppb為0.680； 13.5ppb為0.348；40.5ppb為0.125。則樣本1的濃度范圍是13.5ppb-40.5ppb；樣本2的濃度范圍是1.5ppb-4.5ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中泰樂菌素實際含量。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即：
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
（2）標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標，以泰樂菌素濃度（ng /ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中泰樂菌素實際含量。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索?。?/span>
3、 標準曲線：
B/B0 (%)
0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
(ppb) [μg/kg]
圖1：泰樂菌素檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 0.5 1.5 4.5 13.5 40.5
(ppb) [μg/kg]
圖2：泰樂菌素檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出泰樂菌素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應(yīng)泰樂菌素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一
步操作。
3、混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應(yīng)儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。