土霉素試劑盒
產(chǎn)品介紹
【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物土霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭土霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物土霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較可得出相應殘留物土霉素的含量。
【試劑盒技術(shù)指標】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.1ppb
檢測時間： 75min
土霉素試劑盒樣本檢測下限：
組織樣本（雞、鴨、豬肉/肝、蝦、魚、雞蛋）：
土霉素………………………………………………2ppb
牛奶、蜂蜜樣本：
土霉素………………………………………………4ppb
反應率：
土霉素 …………………………………………… 100%
樣本回收率：
組 織 …………………………………… 85%±20%
牛奶、蜂蜜 ……………………………… 80%±20%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標準溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 酶標記物 12ml…………………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml ………………………綠色帽
5、 底物A液 7ml ………………………棕色帽
6、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
7、 終 止 液 7ml ……………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml ………………白色帽
9、 2X 濃縮復溶液 50ml ·………………藍色帽
土霉素試劑盒【 所用儀器、試劑】
具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）、氮 吹儀、刻度移液管
微量移液器：單道 20μl～200μl、單道100μl～1000μl、多道 30～300 μl
試 劑： 甲醇、正己烷、Na2HPO4·12H2O、NaOHNaH2PO4·2H2O、NaCl
【實驗前溶液配制】
配液1、20mM PBS緩沖液5.16gNa2HPO4*12H2O；0.87gNaH2PO4*2H2O;8.5gNaCl；加入蒸餾水至1000ml；用于樣品提取液
的配制。
配液2、樣品提取液的配制取1ml甲醇與9ml的20mMPBS緩沖液混勻。
配液3、 將2X濃縮復溶液用去離子水按1：1稀釋。(1份濃縮復溶掖+1份去離子水，用于抗體的稀釋和樣本提取后的復溶)。
配液4、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按 所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
u 樣本處理前須知
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具 進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
u 樣本處理：
（a）組織樣本前處理方法（不用過柱）
1、 稱取1±0.05g 均質(zhì)后的樣本于離心管中，加入4ml樣品提取液，振蕩5min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
2、 取1ml上清液收集于另一試管中;加入1ml 正己烷,振蕩1min，室溫4000r/min 以上，離心10min；
3、 取50 μl下層液體于另一容器中，加入200μl樣本稀釋液混合30s；
4、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 20 倍
（b）蜂蜜處理方法
1、 準確稱取1±0.05g 蜂蜜樣本于離心管中，加入4ml 樣品提 取液，強烈混合振蕩5min，室溫 4000r/min以上，離心10min；
2、 取出50μl 上清液于另一試管中，加入450μl樣本稀釋混合30s；
3、 取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 40 倍
（c）牛奶樣品處理方法
脫脂牛奶
1、取出50μl 脫脂牛奶與1950μl樣本稀釋液，混30s；
2、取50 μl 用于分析
脂肪奶
3、吸取1ml 牛奶樣本于離心管中；于15℃環(huán)境3000r/min，離心10min；（如果沒有冷凍離心機請預先冷卻后再離心)
4、取出50μl 牛奶于與1950μl樣本稀釋液，混合30s；
5、取50 μl 用于分析
樣本稀釋倍數(shù): 40 倍
土霉素試劑盒【 酶標**分析程序】
u 操作步驟：
1、 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 按板架及需要取出微孔條，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品/樣本50μl /孔，再加入抗體工作液50μl/孔。輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境反應30min。
5、 取出用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次，每次浸泡15-30秒，拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 每孔加入酶標記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應30min。重復步驟5。
7、 顯色：每孔加入底物液A液50μl再加B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
8、 測定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測在5min內(nèi)讀完數(shù)
據(jù)），測定吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含土霉素的含量成負相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣品的平均吸光度值與標準值比較即可得出樣本所含土霉素濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標準液吸光度值分別是：0ppb為1.892；0.1ppb為1.501；0.3ppb為1.175； 0.9ppb為0.751；2.7ppb為0.421； 8.1ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍是2.7ppb-8.1ppb；樣品2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中土霉素實際濃度。
2、定量分析：
所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個標準（0標準）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
以標準品百分吸光率為縱坐標，以土霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中土霉素實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣品的準確、快速分析。
3、標準曲線：
B/B0 (%)
0.1 0.3 0.9 2.7 8.1
土霉素(ppb) [μg/kg]
圖1：土霉素檢測試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
土霉素(ppb) [μg/kg]
圖2：土霉素檢測試劑盒的精密度
由多個不同的實驗結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出土霉素檢測試劑盒的精密度情況，獲得的標準吸收值的變異系數(shù)（%CV）對相應土霉素濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
土霉素試劑盒【注意事項】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標本沒有回到室溫（20-25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著出現(xiàn)標準曲線不成線性，重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
4、 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進自封袋密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。