氟苯尼考胺試劑盒
產(chǎn)品介紹
【測(cè)定原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)牛奶和水產(chǎn)等樣本中的氟苯尼考胺，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行，樣本中的氟苯尼考胺和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗氟苯尼考胺抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的氟苯尼考胺含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出氟苯尼考胺含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 1ppb
檢測(cè)時(shí)間： 75min
氟苯尼考胺試劑盒樣本檢測(cè)下限：
組織（雞/豬/鴨/魚(yú)/蝦/肝臟）…………………1 ppb
蜂蜜……………………………………………1 ppb
交叉反應(yīng)率
氟苯尼考胺……………………………………100%
氟苯尼考………………………………………15%
氯霉素………………………………………< 0.1%
甲砜霉素……………………………………< 0.1%
回收率
組 織 ………………………………85±10%
蜂 蜜 ………………………………80±10%
【試劑盒組成】
1、 微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb
3、 酶標(biāo)記物 12ml………………… 紅色帽
4、 抗體工作液 7ml………………… 綠色帽
5、 底物A液 7 ml…………………白色帽
6、 底物B液 7 ml …………………黑色帽
7、 終止液 7 ml …………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml……………透明帽
9、 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml ……………藍(lán)色帽
氟苯尼考胺試劑盒【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔板、酶標(biāo)儀、勻質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：?jiǎn)蔚?20ul～200ul、100ul～1000ul、多道 250 ul
試 劑： 乙酸乙酯、正己烷、去離子水
【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
配液1、將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。
配液2、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按 所需用量配制洗滌
液。
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測(cè)的組織樣本包括：動(dòng)物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、豬、牛、羊、兔、魚(yú)、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本處理方法
（a）組織（雞/豬/鴨/魚(yú)/蝦/肝臟）樣本處理方法：
1. 用均質(zhì)器均質(zhì)組織樣本；
2. 稱3±0.05g樣本于離心管中，加入6ml乙酸乙酯，振蕩5min，室溫4000r/min以上，離心10min；
3. 取出2ml上層液體在50-60℃下氮?dú)?空氣吹干或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干
4. 加入1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml稀釋后的復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩30s，室溫4000r/min以上離心15min。
5. 取50 μl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1倍
（b）蜂蜜
1、 取2±0.05 g蜂蜜，放入離心管中，用4ml去離子水溶解；
2、 加入4ml乙酸乙酯上下振蕩5min；
3、 室溫4000r/min以上離心10min；
4、 移取2ml上層清澈液到另一離心管中，50-60℃氮?dú)饬飨赂稍铮?
5、 用1ml稀釋后的復(fù)溶液溶解，混合30s；
6、 取50 μl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1
氟苯尼考胺試劑盒【酶標(biāo)**分析程序】
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的微孔及框架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
5、 取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250μl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍
頭刺破）。
6、 每孔加入酶標(biāo)記物100μl，蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液充分洗，4-5遍（同上），用吸
水紙拍干（拍干后未被**的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
8、 測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，在5min內(nèi)讀完數(shù)
據(jù)），測(cè)定每孔OD值。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與氟苯尼考胺的含量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3，樣本2的吸光度值為1.0，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 1ppb為1.816；3ppb為1.415；9ppb為0.74；27ppb為0.313；81ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是27ppb-81ppb; 樣本2的濃度范圍是3ppb-9ppb，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考胺實(shí)際濃度。
2、定量判定：
所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以氟苯尼考胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中氟苯尼考胺實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大
量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
1 3 9 27 81
(ppb) [μg/kg]
圖1：氟苯尼考胺檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
0 1 3 9 27 81
(ppb) [μg/kg]
圖2：氟苯尼考胺檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出氟苯尼考胺檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)氟苯尼考胺濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
氟苯尼考胺試劑盒【注意事項(xiàng)】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。