苯乙醇胺試劑盒
產(chǎn)品介紹
【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
苯乙醇胺A又稱“克倫巴胺”，用作瘦肉精。被農(nóng)業(yè)部第1519號(hào)公告列為“禁止在和動(dòng)物飲水中使用的物質(zhì)”。目前檢測(cè)方法主要是應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；因其儀器操作繁瑣，不利于大規(guī)模樣本快速篩查；不宜基層推廣。
本公司研發(fā)的苯乙醇胺A快速檢測(cè)試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于動(dòng)物組織（豬肉）、尿樣、飼料等大批量樣品中苯乙醇胺A的殘留量快速檢測(cè)。
苯乙醇胺試劑盒【測(cè)定原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)豬肉等樣本中的苯乙醇胺A，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性**化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行的，樣本中的苯乙醇胺A和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗苯乙醇胺A抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的苯乙醇胺A含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出苯乙醇胺A含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.1ppb
檢測(cè)時(shí)間： 75min
樣本檢測(cè)下限：
尿 樣 ………………………………… 0.1ppb
組 織 ………………………………… 0.2ppb
飼 料 …… …………………………… 4ppb
苯乙醇胺試劑盒交叉反應(yīng)率：
苯乙醇胺A（Salbutamol ）………………… 100%
克倫特羅（Clenbuterol）………………… <0.1%
萊克多巴胺（Ractopamine）……………… <0.1%
多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1%
樣本回收率：
尿 樣 ……………………… 95%±10%
組 織 ……………………… 85%±15%
飼 料 ……………………… 85%±15%
【試劑盒組成】
1、 微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、 苯乙醇胺A高標(biāo)準(zhǔn)溶液（1ml/瓶）100 ppb
4、 酶標(biāo)記物 12ml…………………………紅色帽
5、 抗體工作液 7ml……………………… 綠色帽
6、 底物A液 7ml ……………………棕色帽
7、 底物B液 7ml ……………………黑色帽
8、 終 止 液 7ml ……………………黃色帽
9、 20X濃縮洗滌液40 ml ………………白色帽
10、 2X濃縮復(fù)溶液 50ml…………………藍(lán)色帽
【 所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮?dú)獯蹈裳b置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管
微量移液器：?jiǎn)蔚?0μl-200μl、100μl-1000μl、多道 250μl
試 劑： 濃HCl、甲醇、
苯乙醇胺試劑盒【實(shí)驗(yàn)前溶液配制】
配液1、將2X濃縮復(fù)溶液用去離子水按照1：1稀釋（1 份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于樣本的復(fù)溶。
配液2、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照 1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
配液3、 0.1M HCl 溶液取0.86ml濃HCl加水定溶至100ml。
配液4、樣品提取液溶液取1ml 0.1M鹽酸加到99ml甲醇中。
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（1）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（2）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
（a）尿樣本的處理方法（樣本稀釋倍數(shù)：1）
取50μl清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。
（b）組織樣本的處理方法（樣本稀釋倍數(shù)：2）
1、 稱取2 ±0.05g的組織，加入4ml樣品提取液，振蕩2min,室溫4000r/min以上離心10min。
2、 取上清2ml，于50℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈伞?
3、 加1 ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml稀釋后的復(fù)溶液強(qiáng)烈振蕩混合30s，室溫4000r/min以上離心5min。
4、 取50μl進(jìn)行分析。
（C）飼料樣品的處理方法（樣本稀釋倍數(shù)：40）
1. 稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入4ml樣品提取液，放振蕩器上振蕩2min；室溫 4000r/min以上離心10min；
2. 取出上清液50ul與450ul稀釋好的復(fù)溶液混合30s。
3. 取50ul上清進(jìn)行分析。
【酶標(biāo)**分析程序】
1、 使用前將試劑盒置于室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍；
3、 編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置；
4、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗
滌液。
5、 往酶標(biāo)板微孔中加標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品液50μl/孔，然后加入苯乙醇胺A抗體工作液50μl/孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng)
30min。
6、 倒出孔中液體，將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍打，去除孔中液體。加入250μl/孔洗滌液，15-30s后倒出孔中液體，用吸水紙拍
干，如此重復(fù)操作共洗板5次。
7、 酶標(biāo)記物：加入酶標(biāo)記物100μl/孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng)30 min。取出酶標(biāo)板，如前述洗板5次；
8、 顯色：每孔加入底物A液50μl，再加底物B液50μl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色15min。
9、 測(cè)定：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)），測(cè)定每孔吸光度值
（OD值）。
苯乙醇胺試劑盒【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含苯乙醇胺A量成負(fù)相關(guān)。
1、定性判定：
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。例如樣本1的吸光度值為0.311，樣本2的吸光度值為0.715，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值分別是： 0ppb為1.642；0.1ppb為1.200；0.3ppb為0.780；0.9ppb為0.454； 2.7ppb為0.236；8.1ppb為0.142。則樣本1的濃度范圍是0.9ppb-2.7ppb，樣本2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中苯乙醇胺A的實(shí)際濃度。
2、定量分析：
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以**個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以苯乙醇胺A標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中苯乙醇胺A的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索取）
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 (%)
苯乙醇胺A(ppb) [μg/kg]
圖1：苯乙醇胺A檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV
苯乙醇胺A(ppb) [μg/kg]
圖2：苯乙醇胺A檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出苯乙醇胺A檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)苯乙醇胺A濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行
下一步操作。
3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、 該試劑盒*佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。