pET-N-His-TEV
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
產(chǎn)品包裝
產(chǎn)品價(jià)格
XY2905
1μg
888.00元
pET-N-His-TEV是一種用于表達(dá)N端含有His標(biāo)簽(His tag)的原核表達(dá)質(zhì)粒。本質(zhì)粒N端His標(biāo)簽后含有TEV酶切位點(diǎn)，可通 過(guò)TEV Protease (P2307/P2308)切除N端的His標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。 本質(zhì)粒含有T7啟動(dòng)子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動(dòng)目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面，帶有一個(gè)His標(biāo)簽的編碼序列，含有6個(gè)組氨酸(6X His)。因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有His標(biāo)簽的目的蛋白。 本載體在N端His標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有TEV蛋白酶(TEV Protease)識(shí)別的七肽序列ENLYFQG，對(duì)應(yīng)的核酸序列為 GAGAACCTGTACTTCCAAGGG，因此可在目的蛋白純化后用TEV蛋白酶切除N端His標(biāo)簽。TEV蛋白酶酶切發(fā)生在七肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除His標(biāo)簽的時(shí)候目的蛋白的N端會(huì)留下一個(gè)額外的氨基酸殘基G。 通?？梢圆捎萌?span>BeyoGold
Feature Nucleotide
Position
f1 origin
12-467
Kanamycin resistance ORF
563-1645
PBR 322 origin
2084
LacI coding sequence
3518-4597
T7 promoter
4988-5004
His tag coding sequence
5079-5096
TEV Protease recogniton site sequence
5097-5117
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
5118-5165
T7 Terminator
5251-5297
pET-N-His-TEV質(zhì)粒(5304bp)的圖譜如下：
pET-N-His-TEV的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
rbs
NdeI
His tag
5052
TAACTTTAAG
AAGGAGATAT
ACATATG
CAC
CATCATCATC
ATCAT
GAGAA
ATTGAAATTC
TTCCTCTATA
TGTATAC
GTG
GTAGTAGTAG
TAGTA
CTCTT
TEV
PstI
↓
BamHI HindIII
EcoRI EcoRV SalI
5102
CCTGTACTTC
CAAGGGGGAT
CCAAGCTTCT
GCAGGAATTC
GATATCGTCG
GGACATGAAG
GTTCCCCCTA
GGTTCGAAGA
CGTCCTTAAG
CTATAGCAGC
BglII XhoI
5152
ACAGATCTCT
CGAGTGAGAT
CCGGCTGCTA
ACAAAGCCCG
AAAGGAAGCT
TGTCTAGAGA
GCTCACTCTA
GGCCGACGAT
TGTTTCGGGC
TTTCCTTCGA
pET-N-His-TEV中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-His-TEV)包括：
AatII
Acc65I
AflII
AgeI
AhdI
AleI
AscI
AvrII
BaeI
BbvCI
BfuAI
BmgBI
BmtI
BsaI
BseRI
BsiWI
BspMI
BsrGI
BstBI
Bsu36I
CspCI
DraI
EagI
Eco53kI
FseI
KpnI
MfeI
MscI
NcoI
NheI
NotI
PacI
PmeI
PmlI
PspXI
RsrII
SacI
SacII
SbfI
ScaI
SexAI
SfiI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
SwaI
ZraI
pET-N-His-TEV中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-His-TEV once)包括：
DraIII
CAC,NNN`GTG
242
BssHII
G`CGCG,C
3831
PsiI
TTA|TAA
370
ApaI
G,GGCC`C
4035
PvuI
CG,AT`CG
943
PspOMI
G`GGCC,C
AsiSI
GCG,AT`CGC
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
4041
TspMI
C`CCGG,G
1067
BstEII
G`GTNAC,C
4060
XmaI
MluI
A`CGCG,T
4242
SmaI
CCC|GGG
1069
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
4563
NruI
TCG|CGA
1286
SphI
G,CATG`C
4771
AcuI
CTGAAG(N)14,NN`
1597
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1729
BssSI
C`ACGA,G
1968
XbaI
T`CTAG,A
5034
PciI
A`CATG,T
2141
CA`TA,TG
5074
SapI
GCTCTTCN`NNN,
2258
BamHI
G`GATC,C
5118
BspQI
HindIII
A`AGCT,T
5124
BstZ17I
GTA|TAC
2374
C,TGCA`G
5130
Tth111I
GACN`N,NGTC
2399
EcoRI
G`AATT,C
5136
PflFI
EcoRV
GAT|ATC
5144
PpuMI
RG`GWC,CY
3136
SalI
G`TCGA,C
5148
FspI
TGC|GCA
3164
BglII
A`GATC,T
5154
BglI
GCCN,NNN`NGGC
3182
XhoI
C`TCGA,G
5160
PshAI
GACNN|NNGTC
3401
PaeR7I
HpaI
GTT|AAC
3740
BlpI
GC`TNA,GC
5221
pET-N-His-TEV質(zhì)粒中推薦使用的測(cè)序引物序列如下： T7 primer (4988-5004): 5′-TAATACGACTCACTATA-3′ pET-R primer (5218-5237): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′ pET-N-His-TEV的全序列信息：XY2905 pET-N-His-TEV.txt。 包裝清單：
包裝
—
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