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產(chǎn)品名稱: QuickMutation?基因定點突變試劑盒
產(chǎn)品型號:
產(chǎn)品展商: XYbscience
產(chǎn)品文檔: 無相關(guān)文檔
簡單介紹
QuickMutation?基因定點突變試劑盒(QuickMutation? Site-Directed Mutagenesis Kit)可以快速完成質(zhì)粒DNA的點突變(point mutation)，多個鄰近密碼子的突變，單個或多個鄰近密碼子的缺失(deletion)或插入(insertion)突變。QuickMutation?基因定點突變試劑盒常用于研究基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、RNA或蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，以及用于質(zhì)粒中部分序列的微調(diào)等。
QuickMutation?基因定點突變試劑盒
的詳細(xì)介紹
QuickMutation?基因定點突變試劑盒
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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產(chǎn)品包裝
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產(chǎn)品價格
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XY2206
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QuickMutation?基因定點突變試劑盒
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10次
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307.00元
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QuickMutation?基因定點突變試劑盒(QuickMutation? Site-Directed Mutagenesis
Kit)可以快速完成質(zhì)粒DNA的點突變(point
mutation)，多個鄰近密碼子的突變，單個或多個鄰近密碼子的缺失(deletion)或插入(insertion)突變。
基因定點突變常用于研究基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控、RNA或蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，以及用于質(zhì)粒中部分序列的微調(diào)等。
本試劑盒利用了目前*常用的基因點突變技術(shù)，只需通過基于PCR的突變質(zhì)粒的生成，和基于DpnI的模板質(zhì)粒的消化，轉(zhuǎn)化培養(yǎng)以及后續(xù)的酶切或測序鑒定，即可得到預(yù)期的突變質(zhì)粒 (參考圖1)。DpnI消化僅需5分鐘，累計操作時間不足2小時即可完成
基因的定點突變。
圖1.基因定點突變試劑盒原理圖
本試劑盒使用了*新的保真性更強，靈敏度更高，擴增速度可達(dá)2kb/min，擴增長度可達(dá)12kb的BeyoFusion? DNA
Polymerase，從而大大縮短了突變反應(yīng)所需的時間，進一步提高了基因定點突變的成功率。同時進一步嚴(yán)格驗證了試劑盒中的DpnI，確保能在5分鐘內(nèi)充分消化掉甲基化的模板質(zhì)粒，同時不會消化未甲基化的PCR產(chǎn)物。
參考圖1，使用本試劑盒時需要先設(shè)計長度通常為25-45個堿基互補的兩個引物，在引物中含有預(yù)期的突變位點。然后以待突變的質(zhì)粒為模板，用這兩個引物進行PCR擴增反應(yīng)。這樣可以產(chǎn)生含有預(yù)期的突變位點的雙鏈質(zhì)粒，但這個雙鏈質(zhì)粒中有兩個nick位點。待突變的質(zhì)粒通常來源于DH5α等dam+大腸桿菌，在這些dam+**中質(zhì)粒會被甲基化修飾，而在體外通過PCR擴增得到的質(zhì)粒不會被甲基化。這樣用特異性識別甲基化位點的酶DpnI處理，可以消化掉待突變的質(zhì)粒模板，而使通過PCR擴增出來的含有突變位點的質(zhì)粒被選擇性地保留下來。隨后把DpnI處理過的產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)**后，突變質(zhì)粒中的兩個nick位點可以被大腸桿菌修復(fù)，得到的克隆就會含有預(yù)期的突變質(zhì)粒了。
本試劑盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受態(tài)**的制備。
本試劑盒分別使用6kb和12kb的質(zhì)粒進行了點突變測試，實測突變率接近100%(參考圖2)。實際進行點突變時，可能會因為突變引物的設(shè)計、模板使用量、感受態(tài)效率等因素出現(xiàn)不同的突變率。
圖2. 本試劑盒實際使用效果圖。A. 使用本試劑盒進行點突變獲得的LB平板照片。以一個6kb質(zhì)粒為模板，使用本試劑盒進行PCR擴增以實現(xiàn)點突變，DpnI 37℃消化5min，取10μl產(chǎn)物轉(zhuǎn)化100μl DH5α感受態(tài)，涂板后37℃培養(yǎng)過夜所獲得的LB平板照片。B. 陰性對照LB平板照片。與A相比沒有添加BeyoFusion? DNA Polymerase，這樣模板質(zhì)粒完全被DpnI酶所消化，沒有任何的假陽性克隆產(chǎn)生。C. 突變前后的測序圖。突變前的測序結(jié)果(WT, wild type)和從圖A中挑取9個克隆的測序結(jié)果(Mu,
mutant)。箭頭所示為擬突變的位點，紅色下劃線的為突變前和突變后的堿基。本次實驗的突變率達(dá)到了100%。
本試劑盒共可以進行十次基因定點突變反應(yīng)。
包裝清單：
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱
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包裝
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XY2206-1
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BeyoFusion? DNA Polymerase
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10μl
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XY2206-2
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10X BeyoFusion? Buffer (with Mg2+)
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100μl
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XY2206-3
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dNTP Mix (2.5mM each)
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50μl
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XY2206-4
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DpnI
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10μl
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XY2206-5
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DH5α甘油菌
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200μl
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XY2206-6
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Nuclease-Free Water
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1ml
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說明書
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1份
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保存條件：
-20℃保存，一年有效。
注意事項：
需自行配制LB液體培養(yǎng)基和LB平板以用于**的培養(yǎng)。
需自行設(shè)計和合成用于基因定點突變的引物。需自備用于**轉(zhuǎn)化的試劑。
使用本試劑盒前請先閱讀后面的常見問題。
本產(chǎn)品**于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的**和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。