氧釩核糖核苷復(fù)合物(RNase抑制劑)

      氧釩核糖核苷復(fù)合物(Ribonucleoside Vanadyl Complexes, RVC)是一種常用的核糖核酸酶(ribonucleases, RNase)抑制劑，即RNA酶抑制劑，濃度為200mM，廣泛用于各種RNA樣品的分離純化和檢測(cè)過(guò)程中以抑制RNA降解。
      本產(chǎn)品通過(guò)一種優(yōu)化的方法將四種rNTP的等摩爾混合物與氧化釩混合反應(yīng)而成，可以和RNase以非共價(jià)鍵結(jié)合，形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而抑制RNase活性。
      本產(chǎn)品是一種常用的RNase抑制劑，可廣泛用于各種需要防止RNA降解的RNA分離、純化和檢測(cè)過(guò)程。本產(chǎn)品可以用于mRNA的純化過(guò)程中，作為RNase的抑制劑；也可用于細(xì)胞裂解和蔗糖梯度法細(xì)胞組分分離過(guò)程中，以抑制RNase活性；還可以用于原位雜交中保護(hù)RNA探針，以及DNase I消化DNA時(shí)保護(hù)RNA等。
      本產(chǎn)品可以抑制絕大多數(shù)核糖核酸酶，但以下是例外：DNase I、S1 nuclease及Bacillus cereus ribonuclease。由于本產(chǎn)品不抑制DNase I，所以當(dāng)用DNase I消化去除RNA樣品中的DNA時(shí)，可以采用本產(chǎn)品來(lái)抑制RNase。
      本產(chǎn)品不適合用于體外翻譯體系。
      有報(bào)道稱(chēng)0.4mM以上濃度的RVC對(duì)PCR聚合酶有一定的抑制作用，所以本試劑不推薦直接用于反轉(zhuǎn)錄體系中，反轉(zhuǎn)錄體系中可以選用另外一種RNase抑制劑(XY0102)。也可以通過(guò)后續(xù)提到的方法抽提去除RVC后再用于PCR反應(yīng)。
      很多時(shí)候RNA樣品中的RVC不必去除，可以直接用于后續(xù)的電泳、功能檢測(cè)等。例如，使用本產(chǎn)品純化獲得的mRNA未經(jīng)去除RVC，可以直接用于蛙卵的注射實(shí)驗(yàn)。
      如果需要去除RNA樣品中的RVC，可以直接使用等體積苯酚進(jìn)行抽提。如果苯酚中含有抗氧化劑8-羥基喹啉(8-
hydroxyquinoline)，抽提含有RVC的RNA樣品后會(huì)發(fā)現(xiàn)苯酚的顏色會(huì)變黑。當(dāng)苯酚抽提樣品2-4次后，苯酚的顏色不再明顯變色，提示RVC已經(jīng)被充分去除了。也可以在RNA沉淀前，加入RVC的摩爾數(shù)10倍量的EDTA以充分分解和失活RVC，這樣可以在RNA沉淀時(shí)去除已經(jīng)分解和失活的RVC。
      RVC濃度越高，對(duì)于RNase的抑制效果越強(qiáng)。參考圖1，20mM的RVC可以完全抑制0.00025U/ml的RNase A。本產(chǎn)品濃度為200mM，一般細(xì)胞裂解液中推薦使用終濃度20mM，也可以根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或文獻(xiàn)選擇不同的濃度。每一批的本產(chǎn)品都經(jīng)過(guò)RNase活性抑制的檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果參考圖1。

      圖1. 不同濃度的RVC對(duì)RNase A的抑制效果圖?？?span>RNA和0.00025U/ml RNase A以及指定濃度的RVC一起孵育20分鐘后進(jìn)行電泳檢測(cè)。本圖僅作參考，不同的樣品不同的檢測(cè)條件，實(shí)際獲得的結(jié)果可能和上圖有所差別。
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保存條件：
      -20℃保存，至少一年有效。
注意事項(xiàng)：
      **次使用時(shí)建議分裝，避免反復(fù)凍融。
      去垢劑SDS以及螯合劑EDTA可以抑制RVC的活性，請(qǐng)勿和RVC同時(shí)使用。 
      本產(chǎn)品**于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的**和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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