慢病毒介導(dǎo)BMPR Ⅱ基因沉默對人肝癌移植瘤生長的影響

目的:探討B(tài)MPR II基因RNA干擾(RNAi)的重組慢病毒載體對人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤BMPR II基因表達和移植瘤生長的影響。方法:1、前期研究已明確了具有下調(diào)BMPR II基因的siRNA干擾序列,設(shè)計并合成shRNA oligo,退火后構(gòu)建入干擾慢病毒載體p L/shRNA/F-BMPR II,用構(gòu)建的慢病毒載體p L/shRNA/F-BMPR II轉(zhuǎn)染293T細胞,包裝慢病毒,并用熒光法測定滴度,用包裝的pL/shRNA/F-BMPR II干擾慢病毒侵染HepG2細胞。2、通過實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)、蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)檢測慢病毒轉(zhuǎn)染后各組細胞中BMPR II mRNA及蛋白水平表達的變化,明確處理后BMPR II沉默的效果。3、建立人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤模型,隨機分成實驗組、陰性對照組和空白對照組。隔天1次向各組動物腫瘤內(nèi)分別注射BMPR II shRNA慢病毒顆粒、攜帶無效序列的慢病毒顆粒和0.9%氯化鈉溶液0.2 ml,共5次,測量各組腫瘤體積的大小,繪制腫瘤生長曲線,13天后處死裸鼠。4、應(yīng)用Western blot及**組化技術(shù)檢測移植瘤中BMPR II蛋白水平表達。結(jié)果:1、qRT-PCR及Western bolt檢測結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染組與空白對照組及陰性對照組相比,BMPR II mRNA及蛋白表達水平明顯下調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。2、繪制裸鼠移植瘤生長曲線顯示,與空白對照組和陰性對照組相比,實驗組腫瘤生長速度明顯減慢(P<0.05);空白對照組和陰性對照組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?？瞻讓φ战M和陰性對照組剝脫的瘤體體積分別為(1274.6±133.02)mm3和(1255.2±130.05)mm3,而實驗組剝脫的瘤體體積為(328.6±87.72)mm33、Western blot及**組化技術(shù)檢測顯示:實驗組與空白對照組及陰性對照組相比,移植瘤組織BMPR II蛋白表達明顯下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),而空白對照組和陰性對照組移植瘤組織相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論:1、BMPR II shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染入人肝癌HepG2細胞后,可有效抑制BMPR-ⅡmRNA及蛋白在細胞內(nèi)的表達。2、BMPR II shRNA慢病毒載體瘤內(nèi)注射可抑制人肝癌HepG2細胞裸鼠移植瘤的生長。