提供的小鼠胰腺星狀細胞取自新鮮的組織,按照標準操作流程分離培養(yǎng)。研發(fā)的小鼠胰腺星狀細胞完全培養(yǎng)基(CM-M016)能提供細胞*佳的生長條件,降低雜細胞污染,保證不同批次間細胞質(zhì)量的穩(wěn)定。
同時,還建立了嚴格的細胞鑒定流程,所提供的原代細胞均需經(jīng)過細胞類型特異性標記物、細胞形態(tài)學(xué)等檢測,保證細胞純度在90%以上;同時也需經(jīng)過微生物檢測,保證不含有HIV、HBV、HCV、支原體、**及其他類型的**。
購買小鼠胰腺星狀細胞(細胞培養(yǎng)基)注意事項:
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。
2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜,隔天再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常,請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件;建議直接購買供的完全培養(yǎng)基。
5. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和術(shù)部溝通交流。
6. 該細胞只能用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
小鼠胰腺星狀細胞
細胞基本技術(shù)
凍存細胞的復(fù)蘇
小鼠胰腺星狀細胞應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細胞迅速放入后將細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化。
在無菌臺內(nèi)將完全培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶內(nèi),約5ml左右,然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
傳代:
貼壁細胞:
對于貼壁細胞應(yīng)先吸(倒)盡培養(yǎng)基,吸的越干凈越好,以免中和后加入的消化液,使強度減弱(或PBS洗1-3次)。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml,按此比例進行消化,(根據(jù)經(jīng)驗),晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘,鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后,輕輕振動瓶底使細胞全部脫落,加入2-3ml完全培養(yǎng)基后,輕輕吹打,使細胞基本成單個懸浮,然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?br>
懸浮細胞:
一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi),加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng),如要高濃度可先離心1000rpm,5min后加入完全培養(yǎng)基,輕輕吹勻后,分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
凍存
將貼壁細胞消化后離心收集,懸浮細胞直接離心收集,以完全培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。
小鼠胰腺星狀細胞
支原體污染及檢測:
(1).支原體污染在細胞培養(yǎng)中*常見、不易被查覺,但支原體污染可顯著影響細胞功能干擾實驗結(jié)果。支原體是介于**和病毒之間的目前所知能獨立生活的*小微生物,它無細胞壁,形態(tài)呈高度多形性,*小直徑0.2um,可通過濾器。
1膀胱癌細胞
支原體在污染細胞后,它通過影響細胞的DNA、RNA 的合成及急速消耗培養(yǎng)基中的氨基酸來抑制細胞的生長,并能降低細胞的融合率。因此,在運用各種細胞系進行實驗研究時,首先要證明所用細胞有無支原體的污染。
經(jīng)過嚴格質(zhì)控,不含有**、**、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。
(2).支原體污染后,培養(yǎng)基可不發(fā)生渾濁,細胞病變輕微或不明顯,因此難以發(fā)現(xiàn)。目前,支原體檢測的方法有以下幾種。
(a).相差顯微鏡觀察;
(b).低張?zhí)幚淼匾录t染色法;
(c).熒光染色法;
(d).酶標法;
(e).PCR法:基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)細胞中心使用該方法進行檢測。
優(yōu)點:靈敏度高,檢測耗時短,樣品量小
(只需50ul細胞培養(yǎng)用液上清)。
缺點:引物及制劑費用較高。
★★★★★希望這些基本技術(shù)及資料可以幫到您★★★★★
小鼠胰腺星狀細胞
特點:
1.傳代情況:P2
2.活性好、穩(wěn)定性高、適應(yīng)性強,易培養(yǎng)
3.傳代快、多:2-3天傳一代,普通可傳10代以上 腫瘤細胞無限制
4.純度高達95% 無污染和其他雜細胞
5.有技術(shù)疑問可以提供一對一的解答:專業(yè),及時,耐心
6.貨期短,一般凍存管5-7個工作日,復(fù)蘇7-15個工作日。
★我?guī)旒毎?000種,來源于美國ATCC.
種屬來源:小鼠、大鼠、人、猴、牛
組織來源: 各組織癌細胞、表皮細胞、上皮細胞、等等....
細胞都是經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制。